乳腺癌細胞4T1綠色熒光記小鼠模型

該小動物模型飼養(yǎng)在清潔級動物中，微生物處于監(jiān)控狀態(tài)，動物房有相應(yīng)的保護措施，小鼠不會出現(xiàn)逃逸，不會對外界環(huán)境造成影響。

本模型將GFP基因轉(zhuǎn)染到小鼠乳腺癌細胞4T1中得到了高表達GFP細胞株。將GFP標(biāo)記的小鼠乳腺癌細胞4T1細胞經(jīng)皮下接種至BALB/C小鼠，用活體熒光成像系統(tǒng)連續(xù)觀察，發(fā)現(xiàn)7天即可成瘤，并且腫瘤的體積與發(fā)光強度有相關(guān)性，隨著時間增加，腫瘤逐漸變大，熒光增強（圖1）。和4T1-luc細胞類似，經(jīng)尾靜脈注射接種腫瘤細胞至BALB/C小鼠，14-21天內(nèi)可以觀察到肺轉(zhuǎn)移。

此模型與常規(guī)模型相比具有以下優(yōu)點：1）方法簡單，無創(chuàng)傷性；2）；成瘤率高，死亡率低；3）快速掃描成像(時間少于5 min)；4）可以使實驗動物整體成像；5）可多次重復(fù)在不同時間點檢測，同一批實驗動物體內(nèi)獲得全部時間點的整體數(shù)據(jù)。

應(yīng)用 可用于觀察腫瘤疫苗的抗腫瘤活性，為腫瘤免疫治療提供研究工具。

1. 表達載體構(gòu)建：構(gòu)建chicken β-actin-GFP-NEO載體。CAG啟動子由巨細胞病毒（thecytomegalovirus，CMV)早期增強子（earlyenhancer element）和雞β-肌動蛋白（chickenbeta-actin）啟動子組成，用于驅(qū)動基因在哺乳動物載體的高水平表達。

2. 4T1-eGFP熒光細胞系的獲得：采用脂質(zhì)體2000轉(zhuǎn)染小鼠乳腺癌細胞4T1細胞，轉(zhuǎn)染后24 h，用含有G418的培養(yǎng)液篩選細胞三周，獲得穩(wěn)定表達GFP的細胞株，選擇其中高表達的克隆株擴大培養(yǎng)。

3. 腫瘤細胞的植入及活體熒光成像：收集處于生長對數(shù)期的轉(zhuǎn)染細胞，稀釋至5×106／mL。取BALB/C小鼠進行皮下接種，1×106個細胞/只。分別在接種的第7、14、21和28天四個時間點觀察腫瘤的生長及轉(zhuǎn)移情況情況。觀察前每只小鼠腹腔注射飽和三溴乙醇(0.18 mL/10g)麻醉后放入活體熒光影像系統(tǒng)攝像，Slide Book 4.0軟件進行分析。

女性乳腺是由皮膚、纖維組織、乳腺腺體和脂肪組成的，乳腺癌（breast cancer）是發(fā)生在乳腺腺上皮組織的惡性腫瘤。乳腺癌中99%發(fā)生在女性，男性僅占1%。乳腺并不是維持人體生命活動的重要器官，原位乳腺癌并不致命；但由于乳腺癌細胞喪失了正常細胞的特性，細胞之間連接松散，容易脫落。癌細胞一旦脫落，游離的癌細胞可以隨血液或淋巴液播散全身，形成轉(zhuǎn)移，危及生命。目前乳腺癌已成為威脅女性身心健康的常見腫瘤。

早期乳腺癌往往不具備典型的癥狀和體征，不易引起重視，常通過體檢或乳腺癌篩查發(fā)現(xiàn)。乳腺腫塊、乳頭溢液、皮膚改變、乳頭、乳暈異常、腋窩淋巴結(jié)腫等為乳腺癌的典型體征。

小鼠乳腺癌細胞4T1來自ATCC，是從410.4瘤株中未經(jīng)誘變篩得的6-硫鳥嘌呤抗性細胞株。當(dāng)注射到BALB/c 小鼠中時，4T1自發(fā)產(chǎn)生高轉(zhuǎn)移腫瘤，可轉(zhuǎn)移到肺、肝、淋巴結(jié)和大腦，同時在注射部位形成始發(fā)灶。誘導(dǎo)轉(zhuǎn)移時不需要摘除始發(fā)灶。4T1細胞在BALB/c小鼠中的生長與轉(zhuǎn)移特性與人體中的乳腺癌十分相近。

細胞接種動物為BALB/c小鼠，BALB/c 是白色變種實驗室用鼠，起源于小家鼠Mus musculus，廣泛用于免疫學(xué)、生理學(xué)的動物實驗。