乳腺癌細(xì)胞4TO7熒光素酶標(biāo)記小鼠模型

66c14與4T1和4T07細(xì)胞模型比較。將Luc標(biāo)記的4T1、66c14、4T07細(xì)胞對BALB／c小鼠乳腺原位接種4T1細(xì)胞乳腺原位移植瘤最大，66c14細(xì)胞瘤體次之，4T07細(xì)胞瘤體最小；接種后35 d，三株細(xì)胞乳腺原位移植瘤大小較一致。4T1和66c14原位移植瘤均可發(fā)生轉(zhuǎn)移，其中4T1細(xì)胞較66c14細(xì)胞轉(zhuǎn)移最為嚴(yán)重，而4T07細(xì)胞未見轉(zhuǎn)移。

該小動(dòng)物模型飼養(yǎng)在清潔級動(dòng)物中，微生物處于監(jiān)控狀態(tài)，動(dòng)物房有相應(yīng)的保護(hù)措施，小鼠不會出現(xiàn)逃逸，不會對外界環(huán)境造成影響。

本模型將luc基因轉(zhuǎn)染到小鼠乳腺癌細(xì)胞4TO7中得到了高表達(dá)luciferase細(xì)胞株。將luc標(biāo)記的小鼠乳腺癌細(xì)胞4TO7細(xì)胞經(jīng)原位接種至BALB／C小鼠，用活體熒光成像系統(tǒng)連續(xù)觀察28天，每7天觀察一次。第7天能夠發(fā)現(xiàn)成瘤，并且腫瘤的體積與發(fā)光強(qiáng)度隨時(shí)間變大、增強(qiáng)。

此模型與常規(guī)模型相比具有以下優(yōu)點(diǎn)：（1）無創(chuàng)傷性；（2）可多次重復(fù)在不同時(shí)間點(diǎn)檢測；（3）快速掃描成像(時(shí)間<5 min)；（4）可以使實(shí)驗(yàn)動(dòng)物整體成像；（5）同一實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體內(nèi)獲得全部時(shí)間點(diǎn)的整體數(shù)據(jù)。

1. 細(xì)胞：小鼠乳腺癌細(xì)胞4TO7來自ATCC；載體：構(gòu)建chicken β-actin-luc-NEO載體。CAG啟動(dòng)子由巨細(xì)胞病毒（thecytomegalovirus，CMV)早期增強(qiáng)子（earlyenhancer element）和雞β-肌動(dòng)蛋白（ chickenbeta-actin ）啟動(dòng)子組成，用于驅(qū)動(dòng)基因在哺乳動(dòng)物載體的高水平表達(dá)。

2. 細(xì)胞穩(wěn)定轉(zhuǎn)染：采用脂質(zhì)體2000轉(zhuǎn)染小鼠乳腺癌細(xì)胞4TO7細(xì)胞，轉(zhuǎn)染后24 h，用含有G418的培養(yǎng)液篩選細(xì)胞三周，獲得穩(wěn)定表達(dá)luciferase的細(xì)胞株，選擇其中高表達(dá)的克隆株擴(kuò)大培養(yǎng)。

3. 腫瘤細(xì)胞的植入及活體熒光成像：收集處于生長對數(shù)期的轉(zhuǎn)染細(xì)胞，稀釋至5×106／mL。取0.1 mL細(xì)胞懸液接種于BALB／c小鼠（5周齡，體重15-18 g）右側(cè)第二對乳腺脂肪墊內(nèi)。1×106個(gè)細(xì)胞/只，接種后每隔一周，采用活體熒光影像系統(tǒng)攝像動(dòng)態(tài)觀察腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移情況。觀察前每只小鼠腹腔注射熒光素底物(1.5 mg/10 g)，飽和三溴乙醇(0.18 mL/10 g)麻醉后放人活體熒光影像系統(tǒng)攝像，Slide Book 4．0軟件進(jìn)行分析。

女性乳腺是由皮膚、纖維組織、乳腺腺體和脂肪組成的，乳腺癌（breast cancer）是發(fā)生在乳腺腺上皮組織的惡性腫瘤。乳腺癌中99%發(fā)生在女性，男性僅占1%。乳腺并不是維持人體生命活動(dòng)的重要器官，原位乳腺癌并不致命；但由于乳腺癌細(xì)胞喪失了正常細(xì)胞的特性，細(xì)胞之間連接松散，容易脫落。癌細(xì)胞一旦脫落，游離的癌細(xì)胞可以隨血液或淋巴液播散全身，形成轉(zhuǎn)移，危及生命。目前乳腺癌已成為威脅女性身心健康的常見腫瘤。

早期乳腺癌往往不具備典型的癥狀和體征，不易引起重視，常通過體檢或乳腺癌篩查發(fā)現(xiàn)。乳腺腫塊、乳頭溢液、皮膚改變、乳頭、乳暈異常、腋窩淋巴結(jié)腫等為乳腺癌的典型體征。

4TO7小鼠乳腺癌細(xì)胞，和4T1，66c14細(xì)胞同來源于一BALB／cfC3H小鼠自發(fā)乳腺癌細(xì)胞株，但4TO7細(xì)胞具有高致瘤性，但自發(fā)轉(zhuǎn)移率低。

細(xì)胞接種動(dòng)物為BALB/c小鼠，BALB/c 是白色變種實(shí)驗(yàn)室用鼠，起源于小家鼠Mus musculus，廣泛用于免疫學(xué)、生理學(xué)的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)。