氧嗪酸鉀致急性高尿酸血癥大鼠模型

該模型通過長期觀察普通狼瘡小鼠模型，待其到40周齡時，檢測其dsDNA等，結合皮膚癥狀變化，來確定慢性狼瘡皮膚病模型的建立。目前國際上尚欠缺類似模型，為研究狼瘡皮膚病發(fā)病機制提供了工具。

模型動物飼養(yǎng)在武漢大學人民醫(yī)院動物房SPF級動物實驗室，實驗動物使用許可證SYXK（鄂）2015-0027。

（1）建筑特點

門采用專用凈化密閉門并配備觀察窗。單向走道呈順時針走向設計。屏障系統(tǒng)內共有大鼠飼養(yǎng)室1間，小鼠飼養(yǎng)室3間，隔離觀察室1間，實驗準備室1間，潔物存放室1間，清洗消毒室1間。此外，屏障系統(tǒng)外配有監(jiān)控室、機房和配電室等。

（2）設計參數

室內溫度：20～26°C；日溫差：≤4°C；相對濕度：40%～70%；換氣次數：15～20次/h；氣流速度：≤0．2m/s；壓強梯度：20～50Pa；空氣潔凈度：7級；菌落數：≤3個/皿；氨濃度：≤14mg/m3；噪聲：≤60dB；Z低工作照度：≥200lx；動物照度：15～20lx；晝夜明暗交替時間：12/12h。

（3）通風和空調系統(tǒng)

動物實驗室采用全新風中央空調通風系統(tǒng)。空氣經過初、中、三級過濾器后進入實驗室內環(huán)境。

（4）照明系統(tǒng)

一更、淋浴、二更、氣閘、清潔走道、潔物存放處、污物走道、緩沖間和清洗消毒間、動物飼養(yǎng)室、實驗準備間、隔離觀察室和功能實驗室等安裝有手動和自動開關，根據實際需要，調節(jié)控制室內照明燈。未啟用房間、清潔走道、潔物存放處、污物走道等在每日中午12點和晚上8點開啟紫外線燈照射1h。

（5）通訊系統(tǒng)

因為SPF級動物實驗室的環(huán)境和設施具有特殊要求，人員進入后不能隨意出入，而室內外的聯系又十分重要，故室內各房間均安裝內部電話機，按照房間順序編排電話號碼，各室內電話可相互連通，并均與監(jiān)控室總機保持聯系，保證實驗室內外信息的及時溝通。

（6）監(jiān)控系統(tǒng)

對SPF級動物實驗室的出入口、走道、實驗動物飼養(yǎng)室、功能操作室等重要位置均安裝了可作270°旋轉的攝像機，能夠及時了解設施的運行狀態(tài)；也能有效督促實驗人員執(zhí)行科學的操作規(guī)程，避免人為因素造成室內環(huán)境和設施的污染；并對整個實驗期間的動物狀態(tài)和反應進行觀察，減少對動物的滋擾。

（7）供水系統(tǒng)

SPF級實驗動物飲用水以純凈水為宜。本實驗室采用管道供水，將處理后的純凈水用塑膠管道輸送到屏障系統(tǒng)內實驗準備室，設置接水槽，為實驗動物供應滅菌的飲用水和屏障系統(tǒng)內用水。要經常更換和清洗輸水管道，清洗籠具的用水添加適當比例的84消毒液。

（8）供電系統(tǒng)、警報系統(tǒng)和消防設施

SPF級動物實驗室要求全天候不間斷供風和供電，如果出現故障，不能及時發(fā)現和處理，就可能導致環(huán)境設施的污染、動物感染或死亡，造成嚴重后果。因此應對SPF級動物實驗室使用獨立穩(wěn)定的供電系統(tǒng)，并配備有應急電源。在中央空調機房控制室安裝風機故障警報系統(tǒng)，以便及時檢修和維護，保證設施的安全運行。

（9）消毒滅菌設備

為防止外界物品進入SPF級動物實驗室時所攜帶的細菌污染室內環(huán)境和造成動物交叉感染，按照不同物品的特性，進行紫外線照射消毒、渡槽消毒液消毒或專用的機動門真空滅菌器消毒。

（10）動物飼養(yǎng)籠具

飼養(yǎng)大、小鼠的籠具聚碳酸脂材料的塑膠籠具，具有高透明、耐高壓、耐高溫、耐酸堿等特點。通用的不銹鋼籠具長、寬、高分別為40、30、20cm，適用于單籠飼養(yǎng)有特殊要求的實驗動物，配有底盤和食槽，確保實驗動物有充足的采食和活動空間，同時也保證室內環(huán)境的清潔。

（11）墊料的選擇和使用

在使用塑膠墊料時，墊料是大小鼠直接接觸的鋪墊物，起到吸濕、保暖和造窩的作用。墊料的好壞直接影響到大小鼠術后的恢復、生長發(fā)育和繁殖性能。目前，所使用的墊料主要有玉米秸墊料、刨花墊料。

（12）飼料配制

大小鼠的生產型飼料和維持型飼料必須嚴格按照國家標準，進行科學配制生產。每半年檢測一次飼料的微生物指標和有效營養(yǎng)成分指標，保證飼料的質量。

血清尿酸水平變

給藥后 1 小時 OA 劑量組血清尿酸值開始升高，到 2 小時升至最高，300mg/kg OA 組血清尿酸值升高至( 403． 8 ± 167． 3)μmol /L，且維持到 4 小時仍然還保持在( 402． 1 ± 119． 5) μmol /L，較對照組顯著升高。（表1）。

SPF級Wistar 大鼠，雌雄各半80 只，由中國醫(yī)學科學院醫(yī)學生物學研究所小動物實驗部提供，屏障系統(tǒng)內飼養(yǎng)。飼養(yǎng)環(huán)境溫度 20℃～25℃ ，濕度 40%～70% ，自由飲水和采食。

1. 誘導劑準備

氧嗪酸鉀，Sigma公司產品，純度≥97%。溶于羧甲基纖維素鈉，制備成100mg/kg、300mg/kg和600mg / kg 劑量。

2. 實驗動物

SPF級Wistar 大鼠，雌雄各半80 只，180~240g,飼養(yǎng)于屏障環(huán)境。

3. 給藥

選取 0h 尿酸值正常大鼠 24 只，隨機分為 4 組，6 只/組，OA 用 CMC-Na 溶解，第 1、2、3 組分別腹腔注射 100mg/kg、300mg/kg、600mg/kg 劑量的 OA，OA 濃度分別為 15mg/ml、40mg/ml 和 70mg/ml，第四組腹腔注射 1% CMC-Na作為對照。

4. 模型分析指標

（1） 尿酸水平檢測

給藥后0h、1h、2h、4h、8h 空腹割尾采血 0.4ml于1.5ml EP 管中，置于4℃ 冰箱放置1h，4℃ 、13 000r/min 離心15min，取血清，磷鎢酸法測定尿酸值。

尿酸是嘌呤在人體中代謝的最終產物，主要通過黃嘌呤脫氫酶/氧化酶（XDH / XO）在肝臟中產生，并通過腎臟排泄。高尿酸血癥（HUA）的特征是血液中尿酸水平升高。痛風是一種由于細胞外尿酸鹽過飽和而在關節(jié)和其他組織中沉積尿酸鈉鹽晶體而引起的疾病。 HUA定義為血液中飽和的血清尿酸鹽濃度（>7.0 mg / dl，等于416.5 μmol / l）。痛風和HUA在人類中的發(fā)病率近來一直在增加。HUA也與高血壓和代謝綜合征的發(fā)病機制有關。根據臨床報告，關鍵的病因是尿酸，不僅與痛風的風險增加有關，而且與心血管疾病，腎結石，糖尿病，肥胖和血脂異常的風險增加有關。

黃嘌呤氧化酶主要存在于肝臟和腸道中，可將次黃嘌呤氧化成黃嘌呤，黃嘌呤氧化成尿酸。尿酸是嘌呤代謝的副產物，正常情況下，尿酸由腎臟排泄; 然而，如果由于尿酸過量或腎功能不全而未能通過泌尿系統(tǒng)完全清除，過量的尿酸會結晶沉積在關節(jié)和腎臟中，導致痛風的發(fā)展，痛風是世界范圍內常見的疾病。由于嚙齒類動物體內有尿酸酶，尿酸酶能夠催化尿酸氧化生成尿囊素、過氧化氫和二氧化碳，所以，對于高尿酸血癥嚙齒類動物模型，抑制尿酸酶活性是造模的關鍵。氧嗪酸鉀是一種競爭性尿酸酶抑制劑，可阻斷肝臟尿酸酶的作用，并在嚙齒類動物中產生尿酸，氧嗪酸鉀是合適的造模用藥。