Prkra 小耳小鼠動物模型

該模型通過埋植雌激素，進而建立了皮膚型狼瘡動物模型，主要是檢測其dsDNA，腎臟變化，結合皮膚癥狀變化，來確定狼瘡皮膚病模型的建立。目前國際上尚欠缺類似模型，創新點在于該模型可快速建立模型，屬于誘導性狼瘡皮膚病模型，為研究狼瘡皮膚病發病機制提供了工具。目前國際無報道。

無安全性問題。

1. Prkra 小耳小鼠外耳表型

通過飼養繁育得到5 只有表型的純合型Prkra小耳小鼠,其耳廓結構都非常短小,發育明顯較其正常同胞耳廓小, 失去正常小鼠耳廓亞結構形態,其耳廓形態與人先天性小耳畸形比較類似,外耳道也比正常同胞窄小,小鼠外耳發育的差異在2 周齡時就很明顯。

2. Prkra 小耳小鼠骨骼阿利新藍染色

選取發育到40 d 的小耳小鼠和正常小鼠,剝皮處理,放入75%乙醇固定2 周,然后放入阿利新藍工作液中進行軟骨染色2 d(根據樣品大小調整染色時間),再放入茜素紅工作液中染色1 d,放入1. 5%雙氧水溶液中進行漂白(肉眼可見色素去除為標準),脫色后依次放入20%、40%、60%、80%的甘油進行梯度透明各2 周,最后放入100%純甘油中進行保存。

Prkra 小耳純合型突變小鼠骨骼發育受到明顯影響,體型較正常野生型小,四肢骨發育基本正常,但較細短,后肢表現尤為明顯。Prkra 小耳小鼠胸廓、肋骨數目基本正常,畸形小鼠肋骨發育較細小,尾骨發育較細短,頭顱發育略小。

Prkra小耳小鼠(B6.Cg-Prkralear)

1. Prkra小耳小鼠繁殖

小鼠飼養條件是按照普通常規鼠籠飼養,每個籠不超過5 只小鼠。繁殖方式:用同窩的1 只雄性和1 只雌性交配獲得雜合小鼠,飼養到可以生育的成年鼠后,然后雜合與雜合再交配,得到沒有表型的雜合雌、雄小鼠。

2. Prkra 小耳小鼠的基因點突變檢測

DNA 測序:設計引物進行Sanger 法測序,應用試劑盒法裂解鼠尾提取DNA,洗脫出的DNA 于-20 ℃ 保存。通過引物3 在線平臺( http:/ /primer3.ut.ee/ )設計候選變異引物,Prkra 正向引物為TTCAGTAGCGAGCCAGCAC,反向引物為ACAAC

TGTCCGCTCTGTCG。聚合酶鏈式反應(PCR)反應體系:金牌Mix(green)27 μl,正向引物1 μl,反向引物1 μl,模板DNA 1 μl。

Prkra 小耳小鼠野生型(上)、雜合型(中)和純合型(下)的測序峰圖,突變位點為在2 號染色體76、643、218 bp(GRCm38)上的G 向A 的突變,該突變位點位于第3 外顯子之后

小耳畸形的病因目前還不完全明確，環境和遺傳因素是目前小耳畸形病因研究的重點。先天性小耳畸形在基因突變致病性研究方面還沒有闡明小耳畸形胚胎發育的機制。小耳畸形主要涉及胚胎發育期間第一和第二鰓弓的異常，主要表型涉及外耳發育異常。外耳的耳廓是由第一和第二鰓弓的逐漸融合形成的，在發育過程中第一和第二鰓弓之間是相互作用，兩弓之間的凹槽加深，形成外耳道，從胚胎的起源來分析，外耳的發育至少在一定程度上是由第一和第二鰓弓通過后腦的部分區域來介導的，后腦是鰓弓的神經嵴細胞的來源，在后腦的第四段基因突變可以導致外耳的發育缺陷。

小耳畸形主要是指外耳的先天發育性結構異常，其嚴重程度主要表現為從輕度結構異常到完全性耳廓缺失，并且可伴有外耳道狹窄和外耳道閉鎖等一系列先天性外耳異常，輕者耳廓略小于正常， 畸形嚴重者耳廓全部消失， 絕大多數患者僅遺留花生狀或貝殼狀的殘耳組織。同時一些小耳畸形患者也常合并顱面部畸形，中耳及半側顏面骨及軟組織發育不良等。

Prkra 小耳小鼠屬于自發性突變,純合型小鼠在2 周齡時即可見耳廓較小,身長尺寸比正常稍小。純合型小鼠生長速度比雜合型或野生型同窩小鼠慢,成熟后不能生育,所以該品系主要靠雜合子與雜合子交配來繁育,獲得實驗所需的純合型小鼠。Prkra 小耳小鼠突變位點為在2 號染色體76、643、218 bp(GRCm38)上的G向A 的突變轉換,位于第3 外顯子之后,這可能會影響前體pre-mRNA 的剪接。