大鼠心肌缺血/再灌注模型

心臟結(jié)扎后左心室顏色變得蒼白，再灌注后松幾秒內(nèi)可恢復(fù)紅色。心肌酶檢測肌鈣蛋白、肌紅蛋白、CKMB升高。24小時(shí)后心肌梗死病灶明顯。28天后心室重構(gòu)，心功能減弱，心室纖維化病變。

實(shí)驗(yàn)中涉及動(dòng)物的操作程序已經(jīng)得到中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究所實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用與管理委員會(huì)的批準(zhǔn)(ILAS-GC-2012-001)。

再灌注24小時(shí)后，假手術(shù)組沒有心肌梗死，而手術(shù)組出現(xiàn)白色的梗死灶。再灌注28天后假手術(shù)組沒有出現(xiàn)纖維化，手術(shù)組出現(xiàn)大量纖維化。手術(shù)造模后6-8周，心臟超聲檢測心功能顯著降低，證明心肌病的發(fā)生。

1）大鼠稱重后，使用2%戊巴比妥（用生理鹽水配置），根據(jù)體重戊巴比妥鈉麻醉，劑量50mg/Kg，。根據(jù)大鼠四肢肌張力確定麻醉良好后，仰位固定大鼠于手術(shù)臺(tái)上，頸前區(qū)及心前區(qū)剃毛。2）頸前區(qū)消毒，剪開頸部正中皮膚，分離組織，沿氣管方向進(jìn)行氣管插管，氣管導(dǎo)管接呼吸機(jī)，參數(shù)設(shè)置：潮氣量 2ml/100g體重，頻率55-60次/min，吸呼比 1：1.3）心前區(qū)消毒，于胸骨左緣第四肋水平剪開長約2cm的水平切口，鈍性分離皮膚與肌肉，于胸骨左緣第 4 肋間隙開胸，剝開心包，暴露心臟，在肺動(dòng)脈圓錐與左心耳之間，隱約可見心肌層下面細(xì)小、透亮、粉紅左主冠狀動(dòng)脈前降支。4）無創(chuàng)小圓針5-0絲線在左心耳下緣前降支左側(cè)進(jìn)針，進(jìn)針深度控制在 1mm，寬度為3mm 左右，器械打一活結(jié)，造成暫時(shí)心肌缺血，45min 后松開絲線恢復(fù)冠脈血流。假手術(shù)組左主冠狀動(dòng)脈僅穿線不結(jié)扎。5）通過肉眼觀察結(jié)扎前后左室前壁的局部顏色變化，判斷模型是否成功。結(jié)扎成功時(shí)，可見受累左室局部瞬間蒼白，隨即發(fā)紺、腫脹以及收縮力下降，成功再灌注時(shí)數(shù)秒內(nèi)左室局部迅速充血，缺血心肌顏色由暗紅變?yōu)轷r紅。6）依次縫合關(guān)閉肋間隙，肌肉，以及皮膚，酒精消毒皮膚。觀察大鼠直至蘇醒。

高血壓是由多基因、多環(huán)境因素及個(gè)人不良習(xí)慣相互作用而導(dǎo)致的一種慢性復(fù)雜疾病，也是危害人類健康的主要疾病之一。鹽是高血壓的重要環(huán)境因素，個(gè)體對(duì)鹽負(fù)荷或限鹽呈現(xiàn)不同的血壓反應(yīng)，因此存在鹽敏感性問題[1]。鹽敏感性是高血壓、心腦血管病和其它疾病（如哮喘、胃癌和腎功能不全等）發(fā)病及致死的一個(gè)潛在危險(xiǎn)因素 [2]。因此在高血壓臨床診治過程中，考慮鹽敏感性將有利于對(duì)高血壓分類、危險(xiǎn)分級(jí)以及對(duì)癥治療。

鹽敏感性通常涉及人口、種族、社會(huì)因素以及腎功能、激素水平和飲食習(xí)慣等[3]。不同種族和人群鹽敏感性個(gè)體的檢出率不同，而且血壓的鹽敏感性隨年齡增長而變化，特別是高血壓患者。鹽敏感性由Weinberger ADDIN EN.CITE[4]給出定義：靜脈滴注2L生理鹽水，測量平均動(dòng)脈壓（MAP），次日早晨給予低鈉飲食后再測量MAP，兩次MAP相差≥10mmHg為鹽敏感性，否則為鹽耐受性。Yatabe ADDIN EN.CITE ADDIN EN.CITE.DATA [5]定義鹽敏感指數(shù)（SSI）為低鹽和高鹽飲食后MAP的差值與低鹽飲食MAP的商，若SSI≥5%為鹽敏感性。

高鹽攝入引起血壓升高主要有兩方面原因：一方面是腎小管對(duì)Na+ 重吸收增加，導(dǎo)致水鈉潴留，血漿容量增加，從而血壓升高；另一方面是內(nèi)源性哇巴因物質(zhì)分泌增多，特異性抑制鈉泵，胞內(nèi)鈉離子濃度增加，Na+/Ca2+交換體被激活，細(xì)胞內(nèi)Ca2+ 濃度升高，最終導(dǎo)致血管平滑肌或心肌收縮，引起高血壓[6]，可見鈉水調(diào)節(jié)紊亂是鹽敏感性高血壓發(fā)病的主要誘因。有研究表明，胃腸道在維持機(jī)體鈉水平衡方面具有重要的作用。人體胃腸道每天大約吸收7～9升液體，這一吸收過程主要是由鈉依賴的營養(yǎng)物質(zhì)同向轉(zhuǎn)運(yùn)體和鈉離子轉(zhuǎn)運(yùn)體共同介導(dǎo)。在基礎(chǔ)狀態(tài)和進(jìn)食后，小腸內(nèi)鈉吸收主要是通過鈉氫交換體（NHE）。在小腸細(xì)胞的頂膜上，將腸腔內(nèi)的鈉轉(zhuǎn)運(yùn)至小腸細(xì)胞的電中性鈉氫交換體主要有NHE2、NHE3和NHE8，在結(jié)腸中主要的電中性鈉吸收通道為ENaC。在這些鈉吸收通道中NHE3是非常重要的一個(gè)鈉離子吸收通道。但小腸NHE3的特異性作用還不清楚。DR. Rieg構(gòu)建了小腸特異NHE3敲除小鼠VillinCre, 并發(fā)現(xiàn)該小鼠成年率為0，均為出生后幾天死亡，證實(shí)腸道中NHE3調(diào)節(jié)鈉水平衡至關(guān)重要。

基于腸道NHE3對(duì)于機(jī)體鈉水平衡的調(diào)節(jié)作用，相關(guān)領(lǐng)域已經(jīng)開展了NHE3抑制劑藥物用于高血壓治療的研究，但是NHE3抑制劑都存在明顯的副作用，大鼠及人體實(shí)驗(yàn)證實(shí)NHE3抑制劑藥物能夠引發(fā)中度或重度腹瀉。已有測序研究發(fā)現(xiàn)NHE3編碼基因SLC9A3與先天性鈉腹瀉（CSD）密切相關(guān)，SLC9A3 基因N端鈉離子轉(zhuǎn)運(yùn)結(jié)構(gòu)域發(fā)生突變，能夠引發(fā)NHE3功能缺失，從而誘導(dǎo)CSD發(fā)生。提示直接抑制NHE3的藥物雖然能夠顯著降低血壓及鈉離子重吸收，但無法解決對(duì)機(jī)體的副作用。因此，我們研究通過其它通路間接抑制NHE3功能來降低血壓。最新研究發(fā)現(xiàn)，胃泌素不僅能夠調(diào)節(jié)胃酸分泌，還對(duì)機(jī)體內(nèi)腎臟鈉氫交換體3（NHE3）等離子泵具有重要的調(diào)節(jié)作用。同時(shí)，我們實(shí)驗(yàn)室先前的研究結(jié)果也表明，胃泌素能夠通過抑制NHE3活性參與機(jī)體鈉水代謝和血壓調(diào)節(jié)，從而改善鹽敏感性高血壓大鼠的血壓狀況。由于小腸中存在大量的胃泌素受體，因此我們采用基因工程的方法，敲除小腸道CCKBR基因以抑制胃泌素對(duì)NHE3活性的調(diào)節(jié)作用，從而造成胃腸道鈉水平衡的失調(diào)，誘導(dǎo)小鼠鹽敏感性高血壓模型。