炎癥誘導(dǎo)小鼠腸癌模型

AOM誘導(dǎo)腸上皮粘膜產(chǎn)生損傷，DSS誘導(dǎo)炎癥，二者聯(lián)合使用使腸道黏膜上皮處于持續(xù)的損傷與修復(fù)病程，誘導(dǎo)腫瘤發(fā)生。AOM/DSS誘導(dǎo)3 ~ 4周后，小鼠結(jié)腸黏膜出現(xiàn)彌散性炎癥，上皮隱窩異常，固有層呈現(xiàn)不規(guī)則形態(tài)并有大量炎癥細(xì)胞表達(dá)（淋巴細(xì)胞，漿細(xì)胞）。DSS誘導(dǎo)三個(gè)循環(huán)后在小鼠結(jié)直腸部位看到多個(gè)腺瘤，部分腺瘤會(huì)發(fā)生癌變轉(zhuǎn)移。

該小動(dòng)物模型飼養(yǎng)在清潔級(jí)動(dòng)物中，微生物處于監(jiān)控狀態(tài)，動(dòng)物房有相應(yīng)的保護(hù)措施，小鼠不會(huì)出現(xiàn)逃逸，不會(huì)對(duì)外界環(huán)境造成影響。

氧化偶氮甲烷（AOM）經(jīng)肝乙醇誘導(dǎo)型細(xì)胞色素p450亞型（CYP2E1）催化發(fā)生羥基化反應(yīng)生成活性代謝物甲基氧化偶氮甲醇(methylazomethanol, MAM)，隨后MAM與葡萄糖醛酸和（或）硫酸鹽或谷胱甘肽結(jié)合，通過(guò)膽汁或血液系統(tǒng)進(jìn)入腸道，在腸道中被腸道菌群水解酶分解為游離化合物，后經(jīng)結(jié)腸組織酶或細(xì)菌和結(jié)腸組織激活系統(tǒng)作用，MAM自發(fā)分解為甲基碳正離子從而使DNA烷基化。AOM與DSS聯(lián)合使用后小鼠逐漸出現(xiàn)腹瀉、黏液血便、體質(zhì)量減輕、毛色干枯、肛門脫垂等表現(xiàn)。遠(yuǎn)端大腸上皮異常增生和腺瘤形成（Adenoma）。

BALB／cA-nu BALB/cA-nu小鼠，胸腺缺失，為第11對(duì)染色體隱性遺傳，T細(xì)胞免疫缺陷，B細(xì)胞正常，具有較高的NK細(xì)胞活力，無(wú)接觸敏感性，無(wú)移植排斥反應(yīng)。

制作穩(wěn)定高表達(dá)GFP的細(xì)胞，在熒光顯微鏡下呈強(qiáng)熒光，并且熒光均勻分布于整個(gè)細(xì)胞內(nèi)。單克隆GFP細(xì)胞在無(wú)G418篩選壓力下，傳代數(shù)次后仍能穩(wěn)定高水平表達(dá)GFP（圖1）。細(xì)胞形態(tài)和未轉(zhuǎn)染細(xì)胞無(wú)明顯區(qū)別。

圖1綠色熒光標(biāo)記的BGC823細(xì)胞系

模型制作采用BALB／cA-nu裸小鼠，鼠齡6周，體重16—20 g。BALB／cA-nu裸小鼠在實(shí)驗(yàn)室無(wú)特定病原體飼養(yǎng)間飼養(yǎng)。收集處于生長(zhǎng)對(duì)數(shù)期的MGC803-eGFP腫瘤細(xì)胞，稀釋至5×106cells／mL。取200μL細(xì)胞懸液進(jìn)行皮下注射接種。

按照10-15mg/kg體重單次腹腔注射AOM，然后給予2.5%DSS飲水5天，16天正常飲水，共三個(gè)循環(huán)。