病毒核酸檢測(cè)試劑盒的原理是什么??《病毒學(xué)檢驗(yàn)》大學(xué)復(fù)習(xí)知識(shí)點(diǎn)總結(jié)習(xí)題答案

不幸的孩子，是沒有用過好試劑盒做實(shí)驗(yàn)吧。你下面說的那些，從提取rna，消化基因組，反轉(zhuǎn)錄，加定量pcr的整個(gè)進(jìn)程，假設(shè)用qiagen的盒子，2h多一點(diǎn)就能拿到結(jié)果了。

如今鑒定病毒的盒子，應(yīng)該是進(jìn)一步優(yōu)化過的，差不多2小說搞定。

我國(guó)主要的幾種檢測(cè)試劑盒都是基于RT-PCR原理。由于需求檢測(cè)的病毒樣本濃度有高有低，高的容易檢測(cè)，低濃度就會(huì)漏掉。所以PCR的方法就把病毒基因擴(kuò)增很多倍，到達(dá)可以檢測(cè)出來的濃度。基本操作如下： 01 搜集咽拭子等病毒樣本，經(jīng)過試劑打碎維護(hù)病毒的蛋白質(zhì)殼子，萃取病毒RNA。一方面是萃取，另一反面，打碎之后就沒有了感染性，相對(duì)平安一些。

02 由于這次新冠肺炎是單鏈RNA病毒，所以要先轉(zhuǎn)換成cDNA。這個(gè)可以類比像是視頻文件,mp4,rmvb,avi這些都是罕見格式，同一個(gè)視頻不同格式，意思都一樣，可以相互轉(zhuǎn)換。

03 慣例PCR反響，加熱到94℃把DNA拉鏈拉開，之后再55℃-60℃讓引物，就是拉鏈扣區(qū)分套在兩條拉鏈上，再升溫到72℃讓拉鏈自己復(fù)制，用左拉鏈做模板造一個(gè)右拉鏈，用右拉鏈做模板造一個(gè)左拉鏈。這樣折騰一次為一個(gè)循環(huán)，RNA數(shù)量翻一倍。之后再折騰25-30次。這樣就算很大批的病毒這個(gè)時(shí)分也顯現(xiàn)出來了。

PCR操作方法 這個(gè)方法很主流，也很經(jīng)典。但是這個(gè)操作步驟太多，而且每次都是微量，手一抖就完蛋了。另外引物（就是拉鏈扣）的質(zhì)量也是關(guān)鍵，假設(shè)復(fù)制錯(cuò)了拉鏈，那么整個(gè)檢測(cè)前功盡棄。 當(dāng)然還無機(jī)器清洗的效果，假設(shè)上一個(gè)陽性樣本檢測(cè)之后，沒有洗潔凈設(shè)備，下一個(gè)原本陰性患者能夠就會(huì)假陽性被誤診。中國(guó)大三甲醫(yī)院自己都有PCR檢測(cè)和人員，流程比擬熟練。美國(guó)歐洲很多醫(yī)院偏專科，綜合性超大型少一些，原本很多檢驗(yàn)都是委托外包第三方實(shí)驗(yàn)室。遇到疫情，著急出結(jié)果自己上手，能夠有手法不熟練的狀況。假設(shè)又正好運(yùn)用了某些中國(guó)的無證試劑盒廠商出品的無證試劑，多重誤差疊加，準(zhǔn)確度就會(huì)崩盤。 那么雅培檢測(cè)試劑盒和國(guó)際主流試劑盒有啥不一樣呢？ 這次雅培的五分鐘檢測(cè)試劑盒用的是一個(gè)完全不同的反響體系，簡(jiǎn)稱RPA（重組酶聚合酶擴(kuò)增），也叫做恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)。中心就是用三個(gè)主要原料：單鏈核酸重組酶、單鏈DNA結(jié)合蛋白(SSB)和鏈置換DNA聚合酶，在一個(gè)恒定溫度下37度到42度都可以，直接把DNA套成一個(gè)環(huán)，在本地施任務(wù)業(yè)，直接套用引物，復(fù)制目的DNA。 RPA技術(shù)優(yōu)勢(shì)很清楚： 01 特別快，傳統(tǒng)PCR要45分鐘，由于要重復(fù)升溫降溫。RPA由于是恒溫，所以只需求3-10分鐘。

02 靈敏度高，由于是高度定向擴(kuò)增，所以樣品即使有點(diǎn)兒雜質(zhì)也OK，免除了前處置環(huán)節(jié)，盡量多的保管了樣本。

03 溫度控制要求低，普通是加熱到40℃，但是在緊急狀況下，貼在人身上用人體的體溫36℃、37℃也沒效果。甚至在室溫25℃，也是可以運(yùn)轉(zhuǎn)，就是慢點(diǎn)兒，要等一個(gè)小時(shí)而已。

04 適用性強(qiáng)，面對(duì)RNA病毒，直接在試劑里參與逆轉(zhuǎn)錄酶就好，一鍋端。

益處是很多，但是畢竟RPA也只能設(shè)計(jì)兩個(gè)引物，假設(shè)設(shè)計(jì)不好，能夠就會(huì)錯(cuò)誤的把其他病毒錯(cuò)檢成新冠。但是雅培果真行業(yè)大佬，設(shè)計(jì)巧奪天工，對(duì)照實(shí)驗(yàn)中基本面對(duì)少量其他病毒，都沒有發(fā)生錯(cuò)誤。

反過去，RPA由于太靈敏，之前的樣本有一點(diǎn)兒殘留在機(jī)器里，下一個(gè)樣本就不準(zhǔn)了。所以雅培的設(shè)計(jì)是徹底的全封鎖一次性試劑盒。機(jī)器和樣本不直接接觸，只要激光掃碼這一塊。一切的試劑盒全部都是一次性運(yùn)用，并且外部封鎖樣本處置。這樣就防止了樣品交叉污染，由此可以釋放檢測(cè)才干，縱情地檢測(cè)更低濃度的病毒。因此可以釋放檢測(cè)才干，縱情去檢測(cè)低濃度病毒。

好東西值得吹噓。畢竟一次只能檢測(cè)一個(gè)，關(guān)于窮人和偏遠(yuǎn)地域是OK。但是關(guān)于大規(guī)模檢測(cè)的中央，比如說美國(guó)方艙醫(yī)院，PCR方案短期內(nèi)還是沒法被替代。 引文： 1, Abbott RealTime SARS-CoV-2 For use under an Emergency Use Authorization (EUA) Only http://www.fda.gov/media/136258/download 2，ID NOW? http://www.alere.com/en/home/product-details/id-now.html 3，重組酶聚合酶擴(kuò)增技術(shù)研討停頓 http://html.rhhz.net/SWJSTB/html/2016-6-47.htm 靠譜的安康醫(yī)療科普節(jié)目