鏈脲霉素誘導糖尿病周圍神經病變大鼠模型

該模型通過長期觀察普通狼瘡小鼠模型，待其到40周齡時，檢測其dsDNA等，結合皮膚癥狀變化，來確定慢性狼瘡皮膚病模型的建立。目前國際上尚欠缺類似模型，為研究狼瘡皮膚病發病機制提供了工具。

模型動物飼養在武漢大學人民醫院動物房SPF級動物實驗室，實驗動物使用許可證SYXK（鄂）2015-0027。

（1）建筑特點

門采用專用凈化密閉門并配備觀察窗。單向走道呈順時針走向設計。屏障系統內共有大鼠飼養室1間，小鼠飼養室3間，隔離觀察室1間，實驗準備室1間，潔物存放室1間，清洗消毒室1間。此外，屏障系統外配有監控室、機房和配電室等。

（2）設計參數

室內溫度：20～26°C；日溫差：≤4°C；相對濕度：40%～70%；換氣次數：15～20次/h；氣流速度：≤0．2m/s；壓強梯度：20～50Pa；空氣潔凈度：7級；菌落數：≤3個/皿；氨濃度：≤14mg/m3；噪聲：≤60dB；Z低工作照度：≥200lx；動物照度：15～20lx；晝夜明暗交替時間：12/12h。

（3）通風和空調系統

動物實驗室采用全新風中央空調通風系統。空氣經過初、中、三級過濾器后進入實驗室內環境。

（4）照明系統

一更、淋浴、二更、氣閘、清潔走道、潔物存放處、污物走道、緩沖間和清洗消毒間、動物飼養室、實驗準備間、隔離觀察室和功能實驗室等安裝有手動和自動開關，根據實際需要，調節控制室內照明燈。未啟用房間、清潔走道、潔物存放處、污物走道等在每日中午12點和晚上8點開啟紫外線燈照射1h。

（5）通訊系統

因為SPF級動物實驗室的環境和設施具有特殊要求，人員進入后不能隨意出入，而室內外的聯系又十分重要，故室內各房間均安裝內部電話機，按照房間順序編排電話號碼，各室內電話可相互連通，并均與監控室總機保持聯系，保證實驗室內外信息的及時溝通。

（6）監控系統

對SPF級動物實驗室的出入口、走道、實驗動物飼養室、功能操作室等重要位置均安裝了可作270°旋轉的攝像機，能夠及時了解設施的運行狀態；也能有效督促實驗人員執行科學的操作規程，避免人為因素造成室內環境和設施的污染；并對整個實驗期間的動物狀態和反應進行觀察，減少對動物的滋擾。

（7）供水系統

SPF級實驗動物飲用水以純凈水為宜。本實驗室采用管道供水，將處理后的純凈水用塑膠管道輸送到屏障系統內實驗準備室，設置接水槽，為實驗動物供應滅菌的飲用水和屏障系統內用水。要經常更換和清洗輸水管道，清洗籠具的用水添加適當比例的84消毒液。

（8）供電系統、警報系統和消防設施

SPF級動物實驗室要求全天候不間斷供風和供電，如果出現故障，不能及時發現和處理，就可能導致環境設施的污染、動物感染或死亡，造成嚴重后果。因此應對SPF級動物實驗室使用獨立穩定的供電系統，并配備有應急電源。在中央空調機房控制室安裝風機故障警報系統，以便及時檢修和維護，保證設施的安全運行。

（9）消毒滅菌設備

為防止外界物品進入SPF級動物實驗室時所攜帶的細菌污染室內環境和造成動物交叉感染，按照不同物品的特性，進行紫外線照射消毒、渡槽消毒液消毒或專用的機動門真空滅菌器消毒。

（10）動物飼養籠具

飼養大、小鼠的籠具聚碳酸脂材料的塑膠籠具，具有高透明、耐高壓、耐高溫、耐酸堿等特點。通用的不銹鋼籠具長、寬、高分別為40、30、20cm，適用于單籠飼養有特殊要求的實驗動物，配有底盤和食槽，確保實驗動物有充足的采食和活動空間，同時也保證室內環境的清潔。

（11）墊料的選擇和使用

在使用塑膠墊料時，墊料是大小鼠直接接觸的鋪墊物，起到吸濕、保暖和造窩的作用。墊料的好壞直接影響到大小鼠術后的恢復、生長發育和繁殖性能。目前，所使用的墊料主要有玉米秸墊料、刨花墊料。

（12）飼料配制

大小鼠的生產型飼料和維持型飼料必須嚴格按照國家標準，進行科學配制生產。每半年檢測一次飼料的微生物指標和有效營養成分指標，保證飼料的質量。

注射鏈脲霉素后6周，大鼠足底熱板潛伏期和機械刺痛力都明顯降低；注射后10周血紅細胞中Na+-K+-ATP酶活力也明顯降低，提示大鼠發生痛覺和熱覺敏感，紅細胞變形能力降低，具有周圍神經病變的表型。

1. 檸檬酸-檸檬酸三鈉緩沖液配制

稱取1.197 g檸檬酸，1.264 g檸檬酸三鈉，加90 ml雙蒸水完全溶解后調節pH值至4.4，定容至100 ml，4度保存備用。

2. 鏈脲霉素溶液配制（65 mg/kg）及注射

采用檸檬酸-檸檬酸三鈉緩沖液配制鏈脲霉素溶液，配制后避光冰浴保存。腹腔注射前所有大鼠禁食過夜（自由飲水），一般大鼠的注射體積為1 ml/100 g體重。

3. 實驗動物

可使用SPF級別的SD和Wistar大鼠，體重一般在160-180 g。

4. 模型分析指標

注射鏈脲霉素后3天測定大鼠空腹血糖（禁食4 h，自由飲水），血糖水平大于200 mg/dL的大鼠繼續喂養。6周后，測定大鼠足底熱板潛伏期、機械刺痛力和血紅細胞Na+-K+-ATP酶活力。與同批正常對照組大鼠相比，這些指標明顯降低，表示模型成功。

糖尿病周圍神經病變是由長期高血糖及相關病理生理改變而引起的神經系統損傷，可累及全身周圍神經系統的任何部分，其病理改變主要為神經遠端變性、神經纖維喪失、節段性脫髓鞘和髓鞘再生。臨床常表現為疼痛、燒灼感、敏感、麻木、肌力減退等，嚴重時甚至出現肌肉萎縮、癱瘓、足部潰瘍甚至截肢。

糖尿病周圍神經病變發病機制復雜，至今尚未完全闡明。目前研究發現血管因素（血液供應受損）和代謝因素（神經元或神經纖維內部因高血糖導致病理生理改變）是兩大主要原因。目前公認高血糖是糖尿病周圍神經病變發病的始動因素，主要有4條途徑介導，包括多元醇通路活性增高、糖基化終末產物（Advanced glycation endproducts，AGEs）形成增加、己糖胺通路和蛋白激酶C（protein kinase C，PKC）通路活性增高。