過敏性紫癜大鼠模型

（一）模型的皮膚特征：

在抗原激發(fā)后，24小時(shí)內(nèi)均出現(xiàn)不同程度的出血斑點(diǎn)，大鼠的出血斑點(diǎn)呈彌散分布，直徑1mm大小，周圍無紅腫滲出，出現(xiàn)癥狀的比例大約為40% (圖1)

注：a、模型大鼠皮膚；b.對照大鼠皮膚

圖1 激發(fā)后大鼠的外部特征

（二）模型病理特點(diǎn)：

模型大鼠病理表現(xiàn)為皮下出血，真皮水腫，血管擴(kuò)張充血、出血，炎細(xì)胞浸潤；腎淤血，腎小球囊腔蛋白滲出物，血管擴(kuò)張充血及局灶性炎癥，腎小球系膜基質(zhì)增多，系膜增厚，腎小管內(nèi)蛋白管型等；胃黏膜可見出血，壞死脫落；小腸絨毛血管擴(kuò)張充血，上皮細(xì)胞脫落；肺淤血，血管周圍水腫；肝淤血，灶性炎細(xì)胞浸潤等（圖2）。

注：a. 皮下組織高度水腫，血管擴(kuò)張充血，彌漫性炎細(xì)胞浸潤；b.胃黏膜出血壞死；c. 腎淤血，腎小球囊腔內(nèi)少量紅染滲出物；d. 小腸粘膜淤血，上皮細(xì)胞脫落；e. 肺淤血，血管周圍水腫；f. 肝淤血，灶性炎細(xì)胞浸潤。

圖2 過敏性紫癜大鼠模型的組織病理改變

免疫熒光檢測發(fā)現(xiàn)IgA免疫復(fù)合物在模型組腎小球系膜區(qū)，血管壁及腎小球入球小動脈壁，常呈斑點(diǎn)狀、團(tuán)塊狀、分支狀或短線狀分布（圖3）。

注：a.模型組大鼠腎臟組織，b. 對照。

圖3腎臟IgA的免疫熒光檢測

腎臟PAS染色顯示模型組大鼠的腎臟腎小球系膜增生，系膜基質(zhì)增厚，囊腔蛋白滲出（圖4）。

注：圖a, b分別為模型組和對照組大鼠的腎臟PAS染色。

圖4 大鼠腎臟PAS染色

（三）血常規(guī)及便潛血檢測：

急性期血常規(guī)WBC升高，LYMPH減少，Gran升高（p<0.05），LYMPH%減少，Gran%升高（p<0.01），PLT無明顯改變（圖5）。實(shí)驗(yàn)前便潛血檢測陰性，激發(fā)實(shí)驗(yàn)后10%便潛血陽性。

﹡P<0.01，﹡﹡P<0.05，相對于對照組.

圖5 過敏性紫癜大鼠模型血常規(guī)改變

長春中醫(yī)藥大學(xué)4～12歲，住院 2～5天的12名患者血常規(guī)檢測白細(xì)胞（WBC），粒細(xì)胞（Gran），單核細(xì)胞（MONO）及百分比MONO% 明顯增加，分別超出正常范圍的百分比為33.3% (4/12)，25% (3/12)，41.6% (5/12)，33.3% (4/12)。淋巴細(xì)胞百分比（LYMPH%）明顯減少，低于正常參考范圍的比例為25% (3/12)，血小板未見明顯異常改變（表1）。

表1 患者血常規(guī)檢測

﹡P<0.01，﹡﹡P<0.05，相對于對照組.

（四）模型免疫指標(biāo)改變：

血清IgA升高（p<0.05），IgG升高（p<0.01），C3，C4減少（p<0.05），IgE無明顯改變（圖6）。外周血CD4%下降，CD8%升高（p<0.05），CD4/CD8比值下降，IL-4、TNF-α水平升高，差別均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但I(xiàn)L-2水平無差異（圖7）。

長春中醫(yī)藥大學(xué)4～12歲，住院 2～5天的12名患者血清IgA， IgE升高（p<0.01），IgG升高（p<0.05），C3，C4減少（p<0.05）。血CD4+T細(xì)胞百分比下降，CD4/CD8比值下降，IL-4、TNF-α水平升高，差別均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。（圖8,9）

﹡P<0.01，﹡﹡P<0.05，相對于對照組.

圖6 HSP大鼠模型血清免疫球蛋白和補(bǔ)體改變 圖8 HSP患者血清免疫球蛋白和補(bǔ)體改變

﹡P<0.01，﹡﹡P<0.05，相對于對照組.

圖7 過敏性紫癜大鼠模型血免疫細(xì)胞及細(xì)胞因子的改變

﹡P<0.01，﹡﹡P<0.05，相對于對照組.

圖9 HSP患者血免疫細(xì)胞及細(xì)胞因子的改變

動物模型的制備和應(yīng)用實(shí)驗(yàn)必須在具備相應(yīng)資質(zhì)的實(shí)驗(yàn)室開展。動物模型的制備、應(yīng)用過程中的監(jiān)督管理、處置措施、對環(huán)境和生態(tài)影響等應(yīng)符合國家相關(guān)法律規(guī)定。

非血小板減少性皮膚紫癜癥狀、血尿便常規(guī)、組織病理改變（包括炎癥反應(yīng)炎細(xì)胞浸潤、IgA免疫復(fù)合物沉積等）、血免疫指標(biāo)（血清IgA及相關(guān)免疫細(xì)胞及細(xì)胞因子）等。

1．實(shí)驗(yàn)動物

SD大鼠，4周齡，體重75~95g，22只，雌雄各半，SPF級動物房飼養(yǎng)。

2．模型構(gòu)建

1）過敏體質(zhì)的構(gòu)建

中醫(yī)熱性藥物干姜、蓽茇、胡椒水煎劑以1:1:1的比例混合成15%的水溶液，4℃保存?zhèn)溆谩游镞m應(yīng)1周后，模型組口服給藥，1次/日，連續(xù)3周，對照組給以等量生理鹽水，其它條件相同。

2）抗原致敏

模型動物腹腔注射卵白蛋白生理鹽水與弗氏完全佐劑以1:1比例混合的乳化溶液0.5mL，1次/周，連續(xù)3 周。對照組腹腔注射等量的生理鹽水。

3）抗原激發(fā)過敏反應(yīng)

腹腔注射致敏3周后，動物尾靜脈和皮內(nèi)分別注射1%和0.3%卵白蛋白生理鹽水，激發(fā)過敏反應(yīng)。之后觀察動物皮膚紅腫狀況，照相存檔。

一、疾病概況

過敏性紫癜（allegric puprura，AP），又稱亨-舒綜合癥（Henoch-Sch?nlein purpura，HSP），是一種常見的血管變態(tài)反應(yīng)性出血性疾病，以廣泛的小血管炎為病理基礎(chǔ)，皮膚紫癜、消化道粘膜出血、關(guān)節(jié)腫脹和腎炎等癥狀為其主要臨床特征，是兒童中發(fā)病率最高的血管炎性病。流行病學(xué)研究提示，HSP的發(fā)病率為（10~22）/10萬，好發(fā)年齡為3~10歲，并發(fā)癥多，過敏性紫癜性腎炎（Henoch-Sch?nlein purpuranephritis，HSPN）是最嚴(yán)重的并發(fā)癥。該病復(fù)發(fā)率高，病程遷延，患病率逐年升高，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對其治療無滿意效果。

目前關(guān)于HSP的不少研究仍處在低水平階段，鑒于直接進(jìn)行人體實(shí)驗(yàn)的局限性，在很大程度上需要通過動物實(shí)驗(yàn)進(jìn)行，所以HSP動物模型在整個(gè)HSP的研究中具有舉足輕重的作用。目前，關(guān)于過敏性紫癜動物模型構(gòu)建的報(bào)道很少，因此對該病病因、發(fā)病機(jī)制、臨床治療評價(jià)和藥物開發(fā)在一定程度上受到限制。

二、發(fā)病機(jī)制

病因不明確，一般認(rèn)為與過敏有關(guān)，致敏原可能為食物、感染、藥物、花粉或昆蟲叮咬等，臨床上常不確定。致敏原進(jìn)入機(jī)體刺激漿細(xì)胞，產(chǎn)生抗體，與抗原結(jié)合形成免疫復(fù)合物,主要是IgA免疫復(fù)合物，過多的免疫復(fù)合物不易被巨噬細(xì)胞清除，刺激5-羥色胺、組胺等血管活性物質(zhì)釋放，血管壁通透性增加，組織水腫。免疫復(fù)合物在血管壁或腎小球膜上沉積，產(chǎn)生過敏毒素，使中性粒細(xì)胞在沉積處聚集，并釋放蛋白水解酶，局部組織血管損傷加劇，沉積在胃腸黏膜小血管，引起胃腸道出血。該發(fā)病機(jī)制類似于可溶性免疫復(fù)合物引起的III型超敏反應(yīng)。然而在相同條件下，很多人接受相同抗原刺激后，并未發(fā)生過敏性紫癜，而有些人則首次接觸這些抗原刺激即可發(fā)生致敏反應(yīng)，說明患過敏性紫癜的人需具備特異反應(yīng)體質(zhì)，并且研究發(fā)現(xiàn)這種特異反應(yīng)體質(zhì)具有家族傾向性，即基因易感性。